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為了避免“花板”問題的出現(xiàn),ELISA試劑盒 降低檢測的假陽性率,獲得更理想的實驗結(jié)果,首先在選擇ELISA試劑時,應(yīng)選擇靈敏度高、豬ELISA試劑盒特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、ELISA試劑盒價格操作方便、省時的試劑。并在檢驗的過程中應(yīng)采取下列措施:(1)抽取樣本時應(yīng)抽出足夠檢驗量的血液標(biāo)本,選擇無添加劑的真空試管,禽ELISA試劑盒便于離心,得到足夠的血清。(2)血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1~2h白介素ELISA試劑盒,使血液凝固收縮,上海ELISA試劑盒然后離心檢測或讓血液過夜后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮,讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽性率降至zui低。(3)檢測之前,加大離心轉(zhuǎn)速,盡量延長時間,使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細(xì)胞與血清*分離。(4)加樣時不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白,要按照操作說明書去做,否則會影響實驗結(jié)果。(5)封板溫育時,各孔一定要封嚴(yán),防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。(6)手工洗板時應(yīng)注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。 (7)用洗板機(jī)洗板時應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。(8)洗液的溫度也會影響洗板的干凈程度,尤其是冬天溫度過低時容易出現(xiàn)“花板”問題。
在使用ELISA試劑進(jìn)行血液HBsAg、HCV、HIV及梅毒等各項檢驗的過程中,經(jīng)常發(fā)現(xiàn)空白和陰性、陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔(衛(wèi)生部臨檢中心提供,HBsAg 0.5ng,1ng;HCV、HIV、梅毒均為2NCU)結(jié)果正常,而血液標(biāo)本孔的OD值卻比較高(大多數(shù)OD值≥0.070)。標(biāo)本的陽性率很高,每板除對照孔外,有時陽性高達(dá)10孔之多,而大多數(shù)真陽性標(biāo)本都出現(xiàn)弱陽性結(jié)果。這就是試驗中所說的“花板”問題。這種現(xiàn)象對檢驗結(jié)果的正常判斷造成了很大的影響。筆者在試驗中,針對這種“花板”現(xiàn)象進(jìn)行了認(rèn)真的分析及判斷。
1 標(biāo)本、試劑、儀器
1.1 標(biāo)本 2008年1—12月無償獻(xiàn)血人員的血液標(biāo)本。
1.2 試劑 HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA試劑。
1.3 儀器 LD4-2型離心機(jī),BID RAD1575型洗板機(jī),BID RAD550酶標(biāo)儀。
2 方法
所有無償獻(xiàn)血人員的血液標(biāo)本,按照各個廠家提供的ELISA試劑說明書進(jìn)行HBsAg、HCV、HIV、梅毒等檢驗項目操作。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。
3 結(jié)果
所使用不同廠家的試劑偶爾會出現(xiàn)“花板”問題。
4 分析
在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測的過程中,豬ELISA試劑盒所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,ELISA試劑盒價格排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結(jié)果的影響外,試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常,白介素ELISA試劑盒只有檢測的血液標(biāo)本情況異常。根據(jù)國家和疾控中心報告陽性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下,上海ELISA試劑盒復(fù)查后出現(xiàn)“花板”問題的標(biāo)本基本上仍是陰性。因此,禽ELISA試劑盒原因可能是在標(biāo)本的處理,特別是放置時間、離心速度和離心時間及溫度方面的問題。所以,標(biāo)本的處理就成為實驗結(jié)果的主要可疑因素。ELISA試劑盒
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