人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）ELISA Kit說明書

中文別名：人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）ELISA Kit；人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）ELISA檢測(cè)試劑盒；人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）ELISA酶免試劑盒

英文名稱：Human 6-keto-prostaglandin F1a,6-K-PGF1a ELISA Kit

產(chǎn)品類型：酶免、ELISA Kit

價(jià)格：1500元

種屬：Human

待測(cè)物名稱：6-keto-prostaglandin F1a,6-K-PGF1a

縮寫：6ketoPGF1a

樣本類型：serum, plasma and tissue homogenates

檢測(cè)范圍：3ng/mL -100 ng/mL

試劑盒性能：1）樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。

            2）批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%

保存溫度：4°C（三個(gè)月內(nèi)使用）；-20°C（三個(gè)月后使用）

有效期：4°C（保存6個(gè)月）；-20°C（保存一年）

注意：本試劑盒僅供科研使用

目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理：

  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）水平。用純化的人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a），再與HRP標(biāo)記的6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）濃度。

試劑盒組成：

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為90 ng/mL，60 ng/mL ，30 ng/mL，15 ng/mL，7.5 ng/mL）。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)     

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋      倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。