人I型膠原蛋白（ColⅠ）ELISA試劑盒|Kit說明書

產(chǎn)品名稱：人I型膠原蛋白（ColⅠ）ELISA試劑盒

別名：人I型膠原蛋白（ColⅠ）ELISA檢測試劑盒；人I型膠原蛋白（ColⅠ）ELISA酶免試劑盒

英文名稱：Human Collagen TypeⅠ （ColⅠ） ELISA Kit；Human ColⅠELISA Kit

規(guī)格：96T

保存溫度：2-8°C，避光保存

有效期：至少6個月

價格：1550元

運(yùn)輸方式：白色泡沫盒+充足冰袋+外包紙箱+誠信快遞

售后：售后至文獻(xiàn)發(fā)表成功

樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、組織上清液、組織勻漿、胸腹水、腦脊液、尿液等相關(guān)體液，訂購時需向銷售人員說明檢測樣本，不同樣本，不同試劑盒。

試劑盒組成成分：

微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無

標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無

樣本稀釋液6mL 3mL 無

檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋

底物A 6mL 3mL 無

底物B 6mL 3mL 無

終止液6mL 3mL 無

封板膜2 張2 張無

說明書1 份1 份無

自封袋1 個1 個無

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、2.5、5、10、20、40 ng/mL

人I型膠原蛋白（ColⅠ）ELISA試劑盒|Kit說明書

檢測原理：

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被I型膠原蛋白（ColⅠ）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的I型膠原蛋白（ColⅠ）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

操作步驟：

1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的OD 值。

結(jié)果判斷：

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

試劑盒性能：

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

操作注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為0 的S0 號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5 倍，zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實(shí)際濃度。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

洗板方法：

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次。

2. 自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。