公司提供2種形式的C6細胞，大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞株：

一種是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，-80C也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；再者干冰運輸需要額外添加運費(順豐)。

另一種是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，運費較低(聯(lián)邦或順豐)。

上?；鄯f生物科技有限公司坐落于美麗的嘉定南翔鎮(zhèn)，2014年獲得澳洲BOVOGEN產(chǎn)品代理權(quán)，2015年獲得德國SERANA產(chǎn)品總銷售權(quán)，為國內(nèi)科研機構(gòu)提供高品質(zhì)動物血清和蛋白產(chǎn)品。

慧穎生物為完善的產(chǎn)品供應渠道和售后服務。我們力求工作*，在處理客戶的咨詢、訂購、到貨、售后服務、等方面追求更專業(yè)、更快捷、更及時。

上?；鄯f生物的經(jīng)營原則是“質(zhì)量*，誠信*”，以“質(zhì)量是企業(yè)的生命，誠信是經(jīng)營的資本”為警醒，嚴把所售出商品的質(zhì)量關(guān)，不做任何有損顧客利益的事情。

一直以來慧穎生物都為廣大科研工作者的工作提供材料或者是研究條件，我們是依托廣大科研工作者的信任才能發(fā)展至今，并且與廣大科研者的科研工作一直成長，我們對此一直非常感謝眾多的新老顧客，如今又是一年的試劑購買旺季，我們素爾生物也是為了感謝并且回饋廣大新老顧客，特推出素爾熱賣動物血清，確保正品，確保質(zhì)量穩(wěn)定，爭取批次間差異降到zui小，真正的讓您感到物有所值。素爾生物在此希望廣大科研工作的工作可以步步皆高，生活如意幸福。

慧穎細胞庫400種類細胞株細胞系，20多株耐藥株，超低折扣，種類涵蓋：成纖維細胞 長尾綠猴胚胎細胞 長尾綠猴腎細胞 小鼠乳腺癌細胞 人膀胱癌細胞 人T細胞白血病細胞 人腎細胞腺癌細胞 人腎透明細胞腺癌細胞 人甲狀腺癌細胞 卵巢癌細胞 干細胞 結(jié)腸癌細胞 胃癌細胞 乳腺類細胞 等

以下為購買細胞系后的售后小知識：

1、CO2 培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔？

定期（至少每兩周一次） 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

2、為何培養(yǎng)基保存于4 ℃ 冰箱中， 顏色會偏暗紅色， 且pH值會越來越偏堿性？

培養(yǎng)基保存于4 ℃ 冰箱中， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑（通常為phenol red） 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果， 將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時， 可以通入無菌過濾之CO2， 以調(diào)整pH 值。

3、各種細胞培養(yǎng)用的dish，flask是否均相同？

不同廠牌的dish 或flask， 其所coating 的polymer 不同， 制造程序亦不同， 雖對大部分細胞沒有太大之影響， 惟少數(shù)細胞則可能因使用廠牌不同之dish 或flask 而有顯著之生長差異。

4、購買之細胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形？ 購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？

研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳， 常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后， 加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80℃太久。

我公司出售Elisa試劑盒，一抗，二抗，動物血清，細胞株細胞系，標準品，生化試劑，日本三菱厭氧罐及安寧包系列，GE填料以及凝膠系列產(chǎn)品，質(zhì)粒以及質(zhì)粒搭建。

一個合格的質(zhì)粒含有以下組成部分：

復制起始位點Ori：即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起始點，而真核生物DNA分子有多個復制起始位點。

抗生素抗性基因：可以便于篩選或檢測，如Amp+ 、Kan+。

多克隆位點MCS：克隆攜帶外源基因片段。

P/E：啟動子/增強子。

Terms：終止信號。

加poly(A)信號：可以起到穩(wěn)定 mRNA 作用。

 如何閱讀質(zhì)粒圖譜：

*步：首先看 Ori 的位置，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）。

第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記。

--Ampr   水解β-內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性；

--tetr   可以阻止四環(huán)素進入細胞；

--camr   生成氯霉素羥乙?；苌?，使之失去毒性；

--neor(kanr)   氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使G418（長那霉素衍生物）失活；

--hygr   使潮霉素β失活。

第三步：看多克隆位點（MCS）。它具有多個限制酶的單一切點，便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標志基因的失活，從而便于篩選。MCS決定了能不能放置目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源DNA插入片段大小。質(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來說，外源DNA片段越長，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。

第五步：是否含有表達系統(tǒng)元件，即啟動子－核糖體結(jié)合位點－克隆位點－轉(zhuǎn)錄終止信號，這是用來區(qū)別克隆載體與表達載體。在克隆載體中加入一些與表達調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達載體。選用哪種載體，要以實驗目的為依據(jù)。

啟動子：促進DNA轉(zhuǎn)錄的DNA序列，這個DNA區(qū)域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是DNA分子上可以與RNApol特異性結(jié)合并使之開始轉(zhuǎn)錄的部位，但啟動子本身不被轉(zhuǎn)錄。

增強子/沉默子：增強子為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強鄰近基因轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控序列，其作用與增強子所在的位置或方向無關(guān)（即在所調(diào)控基因上游或下游均可發(fā)揮作用）。/沉默子：負增強子，負調(diào)控序列。

核糖體結(jié)合位點/起始密碼/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖體的兩個結(jié)合位點，對于原核而言是AUG（起始密碼）和 SD序列。

轉(zhuǎn)錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結(jié)構(gòu)基因的zui后一個外顯子中有一個 AATAAA的保守序列，此位點down-stream有一段GT或T富豐區(qū)，這2部分共同構(gòu)成poly(A）加尾信號。

為什么質(zhì)粒圖譜上有的箭頭順時針有的箭頭逆時針？那其實是代表兩條DNA鏈，即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈 DNA，它的啟動子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。

如何選擇載體

把目的基因通過基因工程手段送到生物細胞（受體細胞），需要運載工具（交通工具）攜帶外源基因進入受體細胞，這種運載工具就叫做載體（vector）?；蚬こ趟玫膙ector實際上是用來攜帶目的基因片段進入受體細胞的 DNA。

選擇載體主要依據(jù)構(gòu)建的目的，同時要考慮載體中應有合適的限制酶切位點。如果構(gòu)建的目的是要表達一個特定的基因，則要選擇合適的表達載體。

產(chǎn)品名稱：C6細胞

中文名稱：大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞株

種屬：大鼠

生長狀態(tài)：貼壁生長|懸浮生長|半貼壁

細胞形態(tài)：上皮樣|成纖維樣|圓形|球形|梭形|不規(guī)則形態(tài)

周期：凍存細胞3-4個工作日發(fā)貨，復蘇細胞1-2周發(fā)貨

質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，超低折扣價格，無細菌、真菌、支原體污染。

細胞到達客戶手中，出現(xiàn)任何問題（人為或者非人為），導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。

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ATCC細胞|癌細胞|復蘇細胞|貼壁細胞|國產(chǎn)細胞|正常細胞株|Sceiencell細胞|耐DDP細胞|耐藥株建系 盡在素爾生物 值得信賴

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C6細胞，大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞株 細胞吹打經(jīng)驗之談：

急速的反復吹打肯定容易產(chǎn)生泡沫，這對細胞不利，所以我們要盡量避免。在操作時盡量選用較大口的吸管，吸液時先將吸管內(nèi)空氣排空，再深入液面以下吸液，吹打細胞時，盡量沿著壁吹出液體，操作輕柔，就可zui大程度避免泡沫的產(chǎn)生！

1.有一些細胞可以不用消化液就能夠吹打下來。個人認為能不用消化液是的。譬如巨噬細胞。一直維持巨噬細胞，每次傳代都不用消化液，吹打的時候一般會用瓶內(nèi)未換的剩余舊培養(yǎng)液，這樣比用新的培養(yǎng)基可以減少點泡沫的生成。當然這個一定要求原培養(yǎng)基未被污染。

2. 吹打的時候我們都知道要一點挨著一點吹，這樣不會漏掉地方。而每次都會首先沿著兩條對角線的方向吹打，然后再按照橫著或者是豎著吹打。這樣就可以比較容易把細胞吹下來，因為首先細胞的各個方向都受力了，而且比較均勻，細胞比較容易下來，而且對細胞形態(tài)的維護比較好。

3.對膠頭滴管的要求。膠頭滴管頭部是做成彎曲45度角的形狀，一般都是自己用止血鉗夾住頭部在酒精燈上燒彎。發(fā)現(xiàn)，如果吹打的時候，滴管的頭部邊緣如果是和吹打平面平行的話，反而容易產(chǎn)生泡沫，貼在底部吹，也容易產(chǎn)生泡沫，是能夠有一個角度順著你吹打的方向和滴管*。并且稍微遠離吹打面，這樣滴管內(nèi)的液體容易流出，阻力會減小，就不會產(chǎn)生那么多的泡沫了。

4.控制吹打的節(jié)奏，急速地吹打會很快地產(chǎn)生泡沫，用力越大，越容易產(chǎn)生。是能夠把握住自己的力度和節(jié)奏，有條不紊的吹打。是以自己拿滴管用手的輕松程度為準，如果剛吹幾下很快就累的話，那就證明是節(jié)奏過快。吹完都不累的話那就是太慢力度也不夠。一般在吹完一遍時指頭發(fā)困會比較好。這樣的節(jié)奏能夠比較快速而且有效地完成。

覺得zui關(guān)鍵的操作是不要吹打到底。

培養(yǎng)細胞多年，避免氣泡產(chǎn)生要注意以下兩點：

1 吹打用的培養(yǎng)基不能太少，如果只有1-2mL，氣泡難以避免；

2 吸管每次打出液體后立刻深入液面下吸取液體。

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