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細(xì)胞簡(jiǎn)介：
生長(zhǎng)特性： | 貼壁生長(zhǎng)
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細(xì)胞來源： | 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn) |
培養(yǎng)條件： | 培養(yǎng)基：DMEM-H培養(yǎng)基+10%FBS（推薦HAKATA特級(jí)胎牛血清 貨號(hào)：HS-FBS-50） 氣相：空氣95%，二氧化碳5% 溫度：37℃ |
培養(yǎng)： | 貼壁細(xì)胞 1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無菌操作臺(tái)，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代； 2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積80%-90%，需要對(duì)其進(jìn)行傳代，*傳代比例為1:2。 3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（*消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zui佳消化時(shí)間，記錄zui佳消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。 懸浮細(xì)胞 1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒，然后置于無菌操作臺(tái)，打開瓶口，輕輕吹打后，將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，然后1200rpm離心3min，去上清； 2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基，然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養(yǎng)基）； 3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時(shí)，對(duì)其進(jìn)行傳代，*傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）。
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細(xì)胞總數(shù)： | 1~3*106 |
傳代周期： | 2-3天 |
傳代比例： | 1:2~1:4 |
換液頻率： | 2-3天 |
凍存液： | 90%FBS+10%DMSO |
注意事項(xiàng)：
1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2 瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)
3 對(duì)于貼壁細(xì)胞，若大部分細(xì)胞漂浮，置于培養(yǎng)箱隔夜觀察，大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁，表明細(xì)胞活力正常，繼續(xù)培養(yǎng)，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉；若大部分細(xì)胞仍然不貼壁，將漂浮的細(xì)胞離心收集，用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力，并與本公司銷售人員及時(shí)聯(lián)系。
4 建議客戶收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞的照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問題請(qǐng)于72h內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系，以便于更好的幫您解決問題，超過時(shí)間我段，本公司則默認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好，不免費(fèi)對(duì)后續(xù)細(xì)胞狀態(tài)問題進(jìn)行售后。
5 因細(xì)胞產(chǎn)品的特殊性，如客戶對(duì)本公司細(xì)胞質(zhì)量存有疑問，請(qǐng)于收到細(xì)胞后一個(gè)月內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系，超過時(shí)間段，本公司則默認(rèn)細(xì)胞質(zhì)量?jī)?yōu)良，不承擔(dān)因細(xì)胞產(chǎn)生的任何責(zé)任。
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品牌 貨號(hào) 名稱 規(guī)格
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Gibco 17504044 b 27 supplement B27 10ml
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Gibco 25200072 0.25% trypsin edta (1x) phenol red 胰酶 500 ml
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Gibco 17101015 collagenase type ii 1g 膠原酶II 1g
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Gibco 41500034 MEM培養(yǎng)基 10*1L
Gibco 12400024 DMEM/F12培養(yǎng)基 10*1L
Gibco 12200036 IMCM培養(yǎng)基 10*1L
BIOWEST G-10 西班牙瓊脂糖 100g
Roche 潮霉素B 1g/20ml
merck 蛋白酶K 100mg
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sigma D2650-100ML 二甲基亞砜dmso 100ml
Thermo K1622 RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit 100 reactions
相關(guān)主要細(xì)胞為：C666-1細(xì)胞，MREpic細(xì)胞株，HBMEC細(xì)胞 ，KGN細(xì)胞，IOSE80細(xì)胞，HUVEC細(xì)胞，HAEC細(xì)胞等，細(xì)胞活力好，狀態(tài)*，密度適宜，售后齊全，跟蹤及時(shí)到位！
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