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ST30-3302德國PAN優(yōu)等胎牛血清
胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS):是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細胞的培養(yǎng),一旦胚胎發(fā)育*這些因子自動消失。因此8個月胎齡以上的牛胚胎,已接近足月,不能作為胎牛血清的原料來使用。
新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡稱NBCS):采自出生一天~一周內的新生牛;
小牛血清(Calf Serum):采自出生10-30天的小牛;
成牛血清(Adult Bovine Serum,簡稱ABS):采自成年牛收全血后分離得到血清。
所有血清出廠前均應經過嚴格質控,并附詳細《檢測報告》,
如pH值、滲透壓、內毒素、病毒檢測、促細胞生長能力、無菌等檢查。
其中,由于內毒素直接參與細胞凋亡,對細胞培養(yǎng)結果影響較大,且不同批次的血清,內毒素差異又不易控制。
內毒素含量越低的血清,級別就越高,以胎牛血清為例:
當血清中內毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;
當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清為優(yōu)級胎牛血清;
當血清中內毒素含量≥ 25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清;
胎牛血清 在細胞培養(yǎng)中的作用:
1. 提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2. 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調節(jié)它們所結合的物質活力。
3. 有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
4. 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。
5. 起酸堿度緩沖液作用。
6. 提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余yi dan bai mei 失活,保護細胞不受傷害。
7. 參與細胞凍存。
在細胞培養(yǎng)中,胎牛血清加入基礎培養(yǎng)基的濃度大多為5%~20%(最常見為10%)的。具體到不同試驗,應依據文獻報導,或細胞類型或基礎培養(yǎng)基的成分來確定最佳濃度。
胎牛血清產品描述:
胎牛血清,是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,其組成成份大部分已知,但還有一部分尚不清楚,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。其中不含細胞、纖維蛋白和ning xue yin zi 。
胎牛血清在細胞培養(yǎng)方面通常優(yōu)于其他類型的血清。由于胎牛從未接觸過外界, 與新生牛和小牛血清相比,抗體含量明顯降低,故抗體與培養(yǎng)細胞發(fā)生交叉反應的風險也較低,是理想的細胞生長補充劑。
所有胎牛血清均在當地政府獸醫(yī)部門的監(jiān)督下從注冊的出口屠場采集,符合國際動物協會要求。
為避免不同供體間的個體差異,能夠更好保證實驗數據的連續(xù)性和穩(wěn)定,應使用同批次血清。
同批次血清:將經過初步檢測合格的很多供體胎牛的粗血清,混合在一起,在低溫條件下,經七次加壓過濾,最后三次為0.1 µm無菌過濾處理,得到淺黃色,澄清,稍粘稠液體。同一批次血清質量上基本無差異。不同廠家一個批次產量差異較大,從100升到2000升不等。批次大,更利于試驗的穩(wěn)定和連續(xù)的可參照性。
所有血清出廠前,均經過嚴格質控,每個批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產日期,保質期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內毒素、無菌檢查(細菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等)、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。
胎牛血清儲存條件:
-20°C凍存。
胎牛血清解凍后,應按單次習慣用量分裝,分裝后的血清仍-20°C凍存。
若置于4°C的血清,應在一周內用完。
為保證細胞培養(yǎng)的最佳效果,血清和培養(yǎng)基的配置,應遵循“現用現配"原則。配好的培養(yǎng)液,應于一周內用完。
血清避免反復凍融,避免在4°C或更高溫度儲存過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質。
胎牛血清是否要熱滅活:
shouxian胎牛血清不推薦熱滅活。
熱滅活一般是指在做免疫相關的試驗中,通過加熱滅活掉血清中的補體,以避免對免疫試驗的影響。
在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補體系統,因此,胎牛血清不會真正干預免疫試驗。故不需滅活。
并且,熱滅活反而可能導致胎牛血清中部分重要的生長因子的活性衰減,進而影響細胞培養(yǎng)效果。
若針對某些特殊試驗,對于胎牛血清一定要做熱滅活,國際上推薦熱滅活的方法:40℃水浴,20min。
胎牛血清融化方法:
血清融化 專業(yè)方法:
目的;更好保留血清中活性成分,使細胞培養(yǎng)更穩(wěn)定。
推薦國際血清廠家 專業(yè)融化方法(此方法國際通用,適用于所有種類的血清):
操作 | 溫度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
第一步 | 室溫 | 35 min | 90 min | 100 min |
或15-20℃水浴 | 5 min | 18 min | 20 min | |
第二步 | 20℃水浴 | 15 min | 25 min | 30 min |
第三步 | 37℃水浴 | 20 min | 35 min | 45 min |
注意:
?在水浴過程中,血清的平面要沉浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動瓶身,使血清混勻,但搖動中盡量不要產生泡沫!
胎牛血清 使用說明
血清從-20℃取出后,融化,按推薦體積加入到基礎培養(yǎng)基中,混勻,制備成新鮮培養(yǎng)基。(整個操作需在無菌超凈臺中進行,注意無菌操作。)配置好的培養(yǎng)基推薦在4℃保存,應在1周內用完。
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